无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株

• 作者: 陈伟
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 无痕基因敲除 鼠伤寒沙门菌 luxS基因
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 23-26,30
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 字数: 2811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2016.01.06

摘要

为验证一种基于定点突变的无痕基因敲除技术(Scarless deletion)在鼠伤寒沙门菌中的有效性,本研究以鼠伤寒沙门菌中的luxS基因为靶基因,利用-Red重组酶和重叠延伸PCR(SOE-PCR)引入定点突变,以AAA代替luxS基因的起始密码ATG,改变luxS基因编码序列,通过测序验证并采用2型自诱导物(AI-2)试验检测是否有信号分子产生.基因测序结果显示luxS基因的起始密码ATG被引入的AAA代替;AI-2试验未检测到突变基因菌株的AI-2产物,而对照的野生菌株有AI-2产生,表明突变基因失活,方法有效.利用无痕基因敲除技术构建突变株简单快速,并且不影响被突变基因的另一条DNA单链序列,具有广泛的应用前景.