猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定

• 作者: 冯松林 张二芹 张桂红 王文佳 赵孟孟 邢星 郭依嘉 阮海宇
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体 杂交瘤
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 页码范围: 63-69
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4427字
• 语种: 中文

摘要

根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接pET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合.细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19.这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应.在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础.