脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性

• 作者: 吴根鹏 徐帆洪 朱为 毕慧 王晓 王月红 袁萍 黄帼英
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脑膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白 融合表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 124-128
• 分类号: R378.1+5|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测.方法 筛选并优化fHBP和PorA基冈序列,设计连接片段将PorA连接至fHBP C-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验(serum bactericidal assay,SBA)评价抗原的免疫原性.结果 经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确.重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90％以上.抗血清滴度均在1.0× 105以上.流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-PorA抗血清显示出一定的交叉反应.fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128.结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景.多抗原融合策略需更多的优化考虑.