小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

• 作者: 吴正存 和占龙 唐东红 岳俊 李鸿钧 赵远 陈瑜 马开利 马进
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: resistin 慢病毒载体 靶细胞 表达 小鼠
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 119-125,135
• 页数: 8页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.02.022

摘要

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞.[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达.[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达.[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达.