嗜水气单胞菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

• 作者: 冯书章 刘军 刘彦晶 周伟 祝令伟 纪雪 郭学军 陈萍 高智玲
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜水气单胞菌 荧光定量PCR 检测 应用
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 调查防治
• 页码范围: 1126-1130
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61|R378
• 字数: 2450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.012.016

摘要

目的 建立快速准确检测致病性嗜水气单胞菌的双重荧光定量PCR方法.方法 针对嗜水气单胞菌的16SrDNA和气溶素基因aerA的序列设计特异性引物及TaqMan探针,优化双重荧光定量PCR反应条件,并结合常规PCR方法及分离培养鉴定对临床样品进行检测和对比验证.结果 荧光定量PCR反应体系对质粒标准品的敏感性为10拷贝/反应,是常规PCR检测方法的100倍;该方法检测12种其他种属细菌时未出现假阳性;对实际样品的检测结果其敏感性同样高于普通PCR,定量检测目的基因的拷贝数与样品中目的菌的分离率成正比.结论 本方法敏感性高,特异性好,可用于致病性嗜水气单胞菌感染的诊断、疾病防控及流行病学研究.