人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

• 作者: 仲宁 吴广洲 张林 施舜缤 朱勇 沈振亚
• 来源期刊: 蚌埠医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 病毒 AURKA基因 慢病毒载体 RNA干扰 A549细胞 长春新碱
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1417-1421
• 页数: 5页
• 分类号: R373|Q291
• 字数: 3699字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.11.005

摘要

目的：：针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法：应用pGCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用BrdU法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果：针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将 AURKA shRNA 转导入 A549细胞中,转染效率为100%。 Western blot 检测证实 LV-AURKA 慢病毒显著抑制AURKA的表达,BrdU检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论：慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈振亚	苏州大学医学部	276	741	11.0	16.0
2	吴广洲	南通大学第四附属医院胸外科	4	2	1.0	1.0
3	仲宁	江苏大学附属昆山医院胸外科	6	11	2.0	3.0
4	朱勇	南通大学附属吴江医院胸外科	5	25	2.0	5.0
5	张林	南通大学附属吴江医院胸外科	1	0	0.0	0.0
6	施舜缤	南通大学附属吴江医院胸外科	1	0	0.0	0.0