FILIP-1 L 蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 张舒曼 李淑莲 胡延忠 褚留杰 都景芳 顿国庆 马远方
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: FILIP-1L 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 832-837
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4773字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.06.014

摘要

目的：表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白，制备FILIP-1L多克隆抗体。方法：pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化E． coliBL21大肠杆菌，IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达，Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔，制备FILIP-1L多克隆抗体，用ELISA方法检测多克隆抗体效价，Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果：在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白，经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔，获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体，亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体，WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论：成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白，制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体，为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。