弓形虫ROP18蛋白激酶在酵母中的表达纯化及激酶活性鉴定

• 作者: 侯永恒 吴忠道 周兴旺 廖婉琴 杨兆收 潘爱华 郝桃方
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 ROP18 酵母表达 纯化 激酶活性
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 687-690
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立利用酵母表达系统获得有较高激酶活性的弓形虫棒状体蛋白(ROP18)激酶的表达纯化方法.方法 利用PCR技术从弓形虫基因组DNA扩增弓形虫ROP18基因,通过Gateway系统将ROP18基因克隆到酵母表达载体pEGH-A中.将表达载体pEGH-A-ROP18转化至Y258酵母菌株中并诱导表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE进行纯度鉴定;最后通过激酶活性实验对纯化的重组蛋白进行激酶活性鉴定.结果 构建了弓形虫ROP18激酶重组表达质粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表达系统表达弓形虫ROP18重组蛋白,其分子量约为8.2×104 Mr,SDS-PAGE蛋白电泳显示为单一条带,并具有较高的激酶活性.结论 利用酵母细胞表达系统成功表达并纯化了有激酶活性的弓形虫ROP18蛋白激酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴忠道	中山大学中山医学院	171	835	14.0	21.0
5	潘爱华	中山大学中山医学院	10	59	5.0	7.0
6	侯永恒	中山大学中山医学院	2	0	0.0	0.0
7	郝桃方	中山大学中山医学院	2	0	0.0	0.0
8	廖婉琴	中山大学中山医学院	1	0	0.0	0.0
9	杨兆收	中山大学中山医学院	2	0	0.0	0.0
10	周兴旺	中山大学中山医学院	3	1	1.0	1.0