活性中心突变型胃蛋白酶原的酵母表达及高效激活研究

• 作者: 刘宇 张艳芳 徐甲坤 梁兴国 董平 郭辉 高晓梦
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪胃蛋白酶原 毕赤酵母表达 突变 酶原激活
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 54-61
• 页数: 8页
• 分类号: Q556+.3
• 字数: 6229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20150126

摘要

针对活性中心突变型胃蛋白酶原难以被激活且稳定性差的问题,本文研究了活性中心突变对胃蛋白酶原激活及其稳定性的影响.根据猪胃蛋白酶原A的基因序列设计引物,通过RT-PCR和重叠延伸PCR法分别获得野生型(rPG)和突变型(D32A和D215A)胃蛋白酶原基因片段,其中突变型胃蛋白酶原分别为活性中心关键氨基酸天冬氨酸(D)突变为丙氨酸(A).将野生型和突变型胃蛋白酶原分别在酵母中成功表达,研究其激活、激活后的稳定性和活性情况.研究表明,可以成功地在酵母中表达并纯化野生型和突变型重组猪胃蛋白酶原rPG、D32A和D215A.在pH=2.0条件下,rPG在5 min内即可全部激活,且在37℃具有良好的稳定性,而D32A和D215A需24 h以上才可激活.通过在激活反应中加入野生型胃蛋白酶,D32A和D215A的激活时间可缩短至1h,虽然激活过程有部分酶原发生降解,但激活后获得的突变型胃蛋白酶可稳定3d,激活后的突变型胃蛋白酶无蛋白水解活性.研究结果表明,活性中心关键氨基酸突变后的胃蛋白酶原仍可激活,虽然在激活过程中胃蛋白酶原的稳定性差,但激活后产生的胃蛋白酶稳定性良好,这为进一步研究突变型胃蛋白酶提供了可能和保证.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董平	中国海洋大学食品科学与工程学院	44	442	13.0	20.0
2	刘宇	中国海洋大学食品科学与工程学院	13	102	6.0	10.0
3	梁兴国	中国海洋大学食品科学与工程学院	30	82	5.0	8.0
4	郭辉	中国海洋大学食品科学与工程学院	3	3	1.0	1.0
5	高晓梦	中国海洋大学食品科学与工程学院	2	4	2.0	2.0
6	张艳芳	中国海洋大学食品科学与工程学院	2	20	2.0	2.0
7	徐甲坤	中国水产科学研究院黄海水产研究所	5	9	2.0	2.0