定点突变改造提高纺锤形赖氨酸芽孢杆菌氨基甲酸乙酯水解酶稳定性

• 作者: 刘晓慧 堵国成 夏小乐 方芳 陈坚
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 定点突变 氨基甲酸乙酯水解酶 氨基甲酸乙酯 酶稳定性
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 1233-1242
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150527

摘要

氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate,EC)是一种存在于发酵食品和酿造酒精饮料中的潜在致癌物质.利用生物酶法去除食品饮料中的EC是一种较为安全有效的方法.本研究以来源于赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus fusiformis SC02的氨基甲酸乙酯水解酶为研究对象,采用计算机辅助设计突变位点,构建了其不稳定区域Q328位点的饱和突变体.通过酶学性质分析发现,突变体Q328C和Q328V在40℃下的半衰期分别提高了7.46和1.99倍,Q328R在高温下也有比原酶更好的耐受性.此外,突变体Q328C对乙醇的耐受性和酸耐受性也有所提高.对氨基甲酸乙酯水解酶分子改造的结果表明,通过改造其不稳定区域Q328位点,可以提高酶的热稳定性及对酸和乙醇的耐受性.