过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘畅 吴子君 姜佳美 李腾 梁国标 王志强 郭润民 陈科辉 黄瑞娜
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 RNA干扰 AC16心肌细胞
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 463-466
• 页数: 4页
• 分类号: Q754
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2016.05.007

摘要

目的 构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒.方法 应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定.用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGdeltaE11ox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度.用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达.结果 基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功.APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平.结论 成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体.