环介导等温扩增技术检测醋化醋杆菌

• 作者: 付晓华 周巍 张岩 张志胜 杨岚 王红 章晶晶
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 醋酸菌 醋化醋杆菌 LAMP 灵敏度 产物检测
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 230-237
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2016.05.032

摘要

为实现醋酸菌的快速灵敏检测,以醋化醋杆菌为代表菌株,首次使用环介导等温扩增技术(LAMP)进行16S-23S ITS rRNA核酸扩增,通过特异性检测后对反应条件进行优化,并对扩增产物的检测方法进行比较.结果表明,该组引物特异性强,优化的25 μL体系为:6 mmol/L MgCl2,1.4 mmol/L dNTPs,内引物(FIP和BIP)各0.8 μmol/L,外引物(F3和B3)各0.2 μmol/L,l×Bst DNA聚合酶反应缓冲液,8U Bst DNA聚合酶,0.8 mmol/L甜菜碱,2 μL DNA模板,用灭菌蒸馏水补足体系.62℃反应30 min即可完成扩增反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后检测灵敏度达3.63× 101 CFU/mL.用肉眼观察白色焦磷酸镁沉淀,仅观察到3.63×102 CFU/mL以上的阳性产物,而在终产物中加入10000×0.1 μL SYBR Green Ⅰ后,可通过肉眼观察产物颜色变化,得到与琼脂糖凝胶电泳法相同的检出限,并且缩短了检测时间.