人卵巢 cDNA 文库中与蛋白激酶 Wee1B 相互作用的候选分子的筛选及其调控作用

• 作者: 任丽莉 刘乙蒙 刘超 孟智超 栾治东 肖建英
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白激酶 Wee1B 蛋白相互作用 酵母双杂交 小鼠受精卵
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 866-871
• 页数: 6页
• 分类号: Q132
• 字数: 4291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160505

摘要

目的：利用酵母双杂交系统筛选与蛋白激酶 Wee1B 相互作用的新候选分子，并用生物信息学方法分析其与 Wee1B 相互作用是否能调控小鼠受精卵早期发育。方法：以 pcDNA3.1／V5 His TOPO Wee1B WT 质粒为模板构建 pGBKT7 Wee1B 诱饵质粒；制备酵母感受态细胞，将诱饵质粒 pGBKT7 Wee1B 转化酵母感受态细胞后分别接种 SD／Trp （SDO）、SD／Trp／XαGal （SDO／X）和 SD／Trp／XαGal／AbA plates （SDO／X／A）培养板检测其对酵母的毒性和自身激活能力，利用 Western blotting 法检测 pGBKT7 Wee1B 在酵母中的表达情况；将含有 pGBKT7 Wee1B 的酵母感受态细胞与人卵巢 cDNA 文库相融合，利用酵母双杂交系统筛选出阳性克隆，提取阳性克隆的酵母质粒转化大肠杆菌后进行测序鉴定，最终再经酵母重新转化验证。在 GenBank 中对其进行BLAST 分析，根据基因注释推断其在小鼠受精卵发育过程中可能发挥的作用。结果：双酶切鉴定和测序分析， pGBKT7 Wee1B 诱饵质粒构建成功。将该质粒转入酵母感受态细胞后在 SDO／X／A 平皿上无克隆。将 pGBKT7 Wee1B 和 pGBKT7空载体转入酵母感受态细胞中，菌液接种于 SDO 平皿，2个 SDO 平皿上克隆都均匀生长。从工作板 SDO 和阳性对照板上挑取阳性克隆扩大培养，裂解细胞提取蛋白，Western blotting 法检测示 pGBKT7 Wee1B 对应位置出现条带。含诱饵质粒的酵母菌与人卵巢 cDNA 文库融合，PCR 验证融合后的阳性克隆质粒有插入片段。将质粒测序并经 BLAST 分析筛选出9个与 Wee1B 蛋白激酶存在相互作用的蛋白，生物信息学分析可能与小鼠卵母细胞发育和受精卵发育密切相关的蛋白。结论：利用酵母双杂交系统从人卵巢 cDNA 文库中筛选出9个与 Wee1B 蛋白激酶相互作用的蛋白，这些筛选蛋白可能通过与 Wee1B 相互作用调控小鼠卵母细胞成熟和受精卵早期发育。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘超	锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室	29	89	6.0	7.0
2	刘乙蒙	锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室	13	27	4.0	4.0
3	肖建英	锦州医科大学教务处	28	123	7.0	10.0
4	任丽莉	锦州医科大学基础医学院神经生物学教研室	11	29	3.0	5.0
5	栾治东	锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室	2	0	0.0	0.0
6	孟智超	锦州医科大学基础医学实验教学中心	3	3	1.0	1.0