棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS诱导肺损伤模型中的表达分析

• 作者: 任洛 冯怡 李娅莎 赵丽 钟海英 黄道超
• 来源期刊: 重庆医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 棉鼠 肺表面活性蛋白D 克隆 表达 脂多糖
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 185-191
• 页数: 7页
• 分类号: R563.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13406/j.cnki.cyxb.000798

摘要

目的:初步探讨棉鼠肺表面活性蛋白D(surfactant-associated protein D,SP-D)核苷酸和氨基酸序列与其他物种间的同源性和交叉反应性,观察SP-D mRNA水平和SP-D蛋白在棉鼠肺损伤模型中的表达规律,为探究呼吸道疾病发病机制提供科学的实验依据.方法:SPF级棉鼠32只随机分为生理盐水对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)实验组(实验组再按给药后24、48和96 h分为3个亚组,每组8只).实验组采用腹腔注射给予2 mg/kg的脂多糖,对照组给予相当剂量的生理盐水.提取棉鼠肺总RNA,经RT-PCR扩增SP-D基因并克隆测序,采用生物信息学软件对测序结果进行同源性和系统进化分析;HE染色观察各组棉鼠肺组织病理学变化;real-time PCR检测SP-D mRNA水平;Western blot检测SP-D蛋白表达.结果:棉鼠SP-D基因开放阅读框含1 113 bp,编码370个氨基酸,与部分已知其他物种SP-D核苷酸和氨基酸序列同源性分别在75.64％～90.01％和72.68％～88.56％之间;在SP-D基因构建的系统进化树上,棉鼠与其他啮齿类动物形成一个独特的分支;与对照组相比,实验组肺组织病理特征性变化随LPS刺激时间延长而加剧;SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达水平随LPS处理时间的延长而逐渐增加,在LPS处理24 h后,SP-D mRNA水平和SP-D蛋白表达开始明显增加并出现统计学差异(P＜0.05),48 h时后SP-DmRNA水平和SP-D蛋白表达水平均增加到峰值,96 h后两者仍保持较高水平,与对照组相比有统计学差异(P＜0.01).结论:棉鼠SP-D核苷酸和氨基酸序列与其他物种间具有较高同源性,且棉鼠和其他物种SP-D蛋白间存在交叉反应性;棉鼠SP-DmRNA水平和SP-D蛋白表达水平在肺损伤模型中均存在时间依赖性,可作为判断肺损伤疾病不同发展阶段的生物标记.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵丽		4	4	1.0	2.0
2	李娅莎		16	44	4.0	5.0
3	黄道超		5	5	1.0	2.0
4	钟海英		3	0	0.0	0.0
5	任洛		9	31	2.0	5.0
6	冯怡		1	0	0.0	0.0