低表达 C3aR 人肾足细胞的构建及鉴定

• 作者: 张志诚 赵文紧 郑敬民
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 医学
• 关键词: 低表达 C3aR 转染 人肾足细胞
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 论著 -- 基础研究
• 页码范围: 1167-1170
• 页数: 4页
• 分类号: R692
• 字数: 3165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16571/j.cnki.1008-8199.2016.11.011

摘要

目的：前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体（ C3aR）在糖尿病肾病病中表达增加，但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚，文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系（HPC-C3aRsiRNA），为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提供细胞模型。方法设计合成人C3aR小干扰RNA（ C3aRsiRNA），将其克隆到慢病毒表达载体中，通过与包装质粒共转染293T 细胞，包装成 C3aRsiRNA 慢病毒，利用 C3aRsiRNA 慢病毒感染人肾足细胞 HPC，根据C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特点筛选稳定转染的人肾足细胞。通过荧光定量PCR分析稳定转染的足细胞C3aR的mRNA表达水平，Western blot和免疫组化染色分析稳定转染的肾足细胞C3aR蛋白水平，鉴定稳定转染C3aR低表达的肾足细胞系。结果荧光定量PCR结果显示，与HPC-C3aRsiRNA细胞C3aR的mRNA水平（0．26±0．04）比较，非转染HPC细胞（1．00±0．13）和阴性对照（1．07±0．16）显著升高（P＜0．05）。免疫组化染色显示HPC-C3aRsiRNA细胞的C3aR蛋白水平显著降低。 Western blot结果显示，与HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表达（0．62±0．09）比较，正常HPC、阴性转染的HPC表达（1．00±0．08、1．00±0．22）显著升高（P＜0．05）。结论成功构建了C3aR低表达的肾足细胞系，可为进一步了解C3aR在肾中的生理作用提供细胞模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑敬民	南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所	37	342	11.0	17.0
2	赵文紧	南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所	5	2	1.0	1.0
3	张志诚	南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所	2	0	0.0	0.0