基于miRNA-30的RNAi表达框架的构建及其有效性验证

• 作者: 彭剑雄 李亚红 李思佳 覃淇 赵丹丹 邱彤彤
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNAi 人工miRNA表达框架 A549细胞 HCT116细胞 HEK-293细胞
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 625-629
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.08.16

摘要

目的 构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性.方法 融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与pEGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况并用流式细胞仪检测平均荧光强度.结果 凝胶电泳和测序比对均显示RNAi表达框架与设计的相符,二级结构预测显示,新型RNAi表达框架与人源性miRNA-30的二级结构高度相似;共转染该表达框架与pEGFP-N2质粒48 h后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞的荧光强度均明显减弱,流式细胞仪检测结果显示,3种细胞中共转染组与单独转染组相比平均荧光强度的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 新型RNAi表达框架构建成功,且能有效干扰EGFP在A549,HCT116和HEK-293细胞中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭剑雄	中南大学湘雅医学院医学检验系	27	57	4.0	6.0
2	赵丹丹	中南大学湘雅医学院医学检验系	6	2	1.0	1.0
3	李亚红	中南大学湘雅医学院医学检验系	5	2	1.0	1.0
4	李思佳	中南大学湘雅医学院医学检验系	1	0	0.0	0.0
5	覃淇	中南大学湘雅医学院医学检验系	1	0	0.0	0.0
6	邱彤彤	中南大学湘雅医学院医学检验系	1	0	0.0	0.0