双荧光素酶报告基因系统鉴定has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控

• 作者: 何訸 周君 安振梅 宋昊岚 应斌武 张玫 黄亨建
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: has-miR-577 has-miR-583 双荧光素酶报告基因 FGF-21
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 分子诊断的临床应用
• 页码范围: 916-919
• 语种: 中文

摘要

目的 通过构建成纤维细胞生长因子-21基因(fibroblast growth factor 21,FGF-21)荧光素酶报告基因载体,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控.方法 利用生物学信息网站对has-miR-577和has-miR-583靶向结合FGF-21 3'UTR区的位点进行分析,设计合成包含与has-miR-577和has-miR-583结合序列及其突变序列的FGF-21基因片段,构建野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut) FGF-21双荧光素酶报告基因载体.进行双酶切电泳和测序鉴定后,FGF-21野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别+ [hsa-miR-577模拟物、hsa-miR-583模拟物和miR无义序列阴性对照(miR negative control,miR-NC)]转染293T细胞,检测荧光素酶活性,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21表达的影响.结果 双酶切电泳和测序结果显示,野生型(psiCH ECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut)基因载体片段大小、序列结果与实验预期一致,载体构建成功.has-miR-577和has-miR-583可抑制野生型FGF-21载体的荧光表达(P＜0.05),而对突变型FGF-21载体的荧光表达无抑制作用.结论 has-miR-577和has-miR-583可以靶向调控FGF-21的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安振梅		1	1	1.0	1.0