舌鳞癌侵袭转移相关蛋白CD63-LEL结构域表达及纯化

• 作者: 侯美玲 刘文慧 李新 梁雪雪 王文 谭李倩 赵微
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 舌鳞癌 CD63-LEL结构域 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 171-174,187
• 页数: 5页
• 分类号: R78
• 字数: 3521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2016.02.019

摘要

目的 构建pET-29a-CD63-LEL重组质粒,诱导蛋白表达,鉴定表达产物并纯化蛋白,为后续研究CD63-LEL蛋白对人舌鳞癌侵袭转移的影响奠定基础.方法 根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)中查询到的CD63-LEL基因序列,运用RT-PCR技术从TCA-8113细胞中获得CD63-LEL的cDNA序列,经PCR、双酶切及测序确定获得pET-29a-CD63-LEL重组载体后,转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)感受态中,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导表达,运用镍柱亲和层析法纯化获得pET-29a-CD63-LEL融合蛋白.结果 成功构建了pET-29a-CD63-LEL重组质粒,经SDS-PAGE凝胶电泳检测:在37℃,1 mmol/L IPTG诱导12 h pET-29a-CD63-LEL蛋白表达量高;在咪唑浓度为MCAC-80/100/200/500条件下可洗脱目的蛋白,Western blot检测Ni-NTA agarose纯化蛋白大小位于26 kU和35 kU处.结论 在大肠埃希菌中获得了pET-29a-CD63-LEL蛋白的大量表达,经镍柱亲和层析可得到较纯的pET-29a-CD63-LEL蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李新		99	106	5.0	7.0
2	赵微		24	123	6.0	10.0
3	刘文慧		2	1	1.0	1.0
4	侯美玲		2	1	1.0	1.0
5	梁雪雪		2	1	1.0	1.0
6	王文		2	4	1.0	2.0
7	谭李倩		1	0	0.0	0.0