毛冬青基因组DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系的优化

• 作者: 付铨盛 卫滢 席秀丽 黄海波
• 来源期刊: 中国现代中药
• 关键词: 毛冬青 DNA提取 反应体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 415-419
• 页数: 5页
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.005

摘要

目的:优化毛冬青基因组DNA提取方法,建立稳定性高、重现性好、适合其遗传差异分析的ISSR-PCR反应体系.方法:对比CTAB法、mCTAB法、SDS法、蛋白酶K法及植物基因组提取试剂盒的提取效果后,选择mCTAB法结合蛋白酶K法提取毛冬青基因组DNA,并优化了蛋白酶K用量.利用正交试验设计,对毛冬青ISSR-PCR反应的5个因素(Mg2、dNTPs、Primer、DNA、Taq酶)进行优化,PCR结果使用SPSS16.0软件进行分析,基于优化后体系对哥伦比亚大学公布的100条ISSR引物进行筛选,确定退火温度.结果:采用蛋白酶K-mCTAB法实现了4h内提取高纯度毛冬青基因组DNA,蛋白酶K用量为20 ng· mL-时DNA平均提取量较传统CTAB法提升9.5倍;毛冬青ISSR-PCR最终反应体系为Mg2+2.5 mmol·L-1,dNTPs 0.15 mmol·L-1,Primer 0.4μmol·L-1,DNA 70 ng,Taq酶0.5U.实验从100条引物中筛选出16条引物并确定退火温度,绘制出毛冬青ISSR指纹图谱.结论:蛋白酶K-mCTAB法适合毛冬青基因组DNA的提取,筛选出的反应体系、引物及退火温度能够满足毛冬青ISSR-PCR实验的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄海波	广州中医药大学中药学院	40	304	10.0	15.0
2	付铨盛	广州中医药大学中药学院	8	12	2.0	3.0
3	卫滢	广州中医药大学中药学院	2	2	1.0	1.0
4	席秀丽	广州中医药大学中药学院	1	1	1.0	1.0