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摘要:
目的 克隆须癣毛癣菌烯醇化酶(Enolase)基因全长cDNA,制备具有高免疫原性的须癣毛癣菌烯醇化酶重组蛋白.方法 选用须癣毛癣菌肉芽肿株(774),提取总RNA,采用eDNA快速末端扩增法(RACE)克隆Enolase基因的全长序列,并对该片段进行序列测定和分析.同时对该片段进行了克隆、原核表达及纯化.结果 获得须癣毛癣菌Enolase基因全长序列1 491bp,拥有一个1 317bp的开放阅读框,编码438个氨基酸,5'非编码区为106bp,3 '非编码区为68bp;同源比对与断发毛癣菌Enolase同源性达100%,与红色毛癣菌同源性达98%.构建了pET-16b-Enolase表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确,pET-16b-Enolase诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化后表达质粒能在BL21(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果.结论 克隆出须癣毛癣菌Enolase基因cDNA全长序列,原核表达和纯化成功,为进一步研究重组须癣毛癣菌Enolase的作用奠定了基础.
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文献信息
篇名 须癣毛癣菌烯醇化酶基因的克隆、原核表达与纯化
来源期刊 中国皮肤性病学杂志 学科 医学
关键词 须癣毛癣菌 烯醇化酶 基因序列 原核表达 蛋白纯化
年,卷(期) 2016,(6) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 574-578
页数 5页 分类号 R756
字数 语种 中文
DOI 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201507029
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研究主题发展历程
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须癣毛癣菌
烯醇化酶
基因序列
原核表达
蛋白纯化
研究起点
研究来源
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国皮肤性病学杂志
月刊
1001-7089
61-1197/R
大16开
陕西省西安市西五路157号
52-17
1987
chi
出版文献量(篇)
9358
总下载数(次)
21
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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