须癣毛癣菌烯醇化酶基因的克隆、原核表达与纯化

• 作者: 刘金鹏 张芳芳 戴安安 杨国玲 鄢秋龙
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 须癣毛癣菌 烯醇化酶 基因序列 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 574-578
• 页数: 5页
• 分类号: R756
• 语种: 中文
• DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201507029

摘要

目的 克隆须癣毛癣菌烯醇化酶(Enolase)基因全长cDNA,制备具有高免疫原性的须癣毛癣菌烯醇化酶重组蛋白.方法 选用须癣毛癣菌肉芽肿株(774),提取总RNA,采用eDNA快速末端扩增法(RACE)克隆Enolase基因的全长序列,并对该片段进行序列测定和分析.同时对该片段进行了克隆、原核表达及纯化.结果 获得须癣毛癣菌Enolase基因全长序列1 491bp,拥有一个1 317bp的开放阅读框,编码438个氨基酸,5'非编码区为106bp,3 '非编码区为68bp;同源比对与断发毛癣菌Enolase同源性达100％,与红色毛癣菌同源性达98％.构建了pET-16b-Enolase表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确,pET-16b-Enolase诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化后表达质粒能在BL21(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果.结论 克隆出须癣毛癣菌Enolase基因cDNA全长序列,原核表达和纯化成功,为进一步研究重组须癣毛癣菌Enolase的作用奠定了基础.