建立转酮酶酶活测定方法及应用

• 作者: 朱欣娜 李胜营 毛小琴
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 转酮酶 酶活测定 木酮糖激酶
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 840-845
• 分类号: Q939.97
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201607024

摘要

目的 转酮酶是非氧化磷酸化戊糖途径中的关键酶.5-磷酸木酮糖是分析测定转酮酶酶活性的底物,然而因该底物难以化学合成,生产成本高,从而导致厂家停止生产,目前市场上无法得到.因此有必要建立起新的转酮酶酶活测定方法.方法 (1)将酿酒酵母的木酮糖激酶基因(XKS1)克隆于pET30a载体.(2)纯化木酮糖激酶.(3)建立酶偶联反应,以木酮糖为底物,将其转化为5-磷酸木酮糖,用于转酮酶酶活的测定.结果 (1)成功地将XKSI基因克隆于pET 30a得到质粒pXZ-X004.(2)质粒pXZ-X004诱导表达产生C端His-tag标签的XK,用Ni柱分离得到纯化的木酮糖激酶(XK).(3)纯化的XK活性为21.0 U/mg protein,当用12.5％的甘油保存于-80℃环境1个月,仍有74％的活性.(4)用纯化的XK建立了转酮酶(TK)酶活测定新方法,当TK酶活低至0.008 75 U时仍能够利用新方法检测.结论 本实验通过克隆和表达XKS1基因,成功地建立了TK酶活性测定的新方法,并应用于木糖代谢工程菌株TK酶活的测定,为医学和生态学领域中TK酶活的分析奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李胜营	昆明理工大学医学院	1	0	0.0	0.0
5	朱欣娜	中国科学院天津工业生物技术研究所	6	0	0.0	0.0
6	毛小琴	昆明理工大学医学院	4	0	0.0	0.0