凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达及性质研究

• 作者: 刘光明 曹敏杰 王慈 翁凌 蔡秋凤 詹春兰
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 凡纳滨对虾 丝氨酸蛋白酶抑制剂 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 65-72
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2016.07.010

摘要

通过PCR扩增得到凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)基因,将其插入大肠杆菌表达载体pET-28a,实现丝氨酸蛋白酶抑制剂在BL21 (DE3)菌中以包涵体的形式大量表达.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量约为15 ku,与预期大小一致.将包涵体溶解后,利用Ni2+亲和柱层析对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组SPI.经复性后的SPI对胰蛋白酶具有较高的抑制活性.该抑制剂在90℃内加热1h,可保留90％以上的抑制活性,且在pH 1～8范围内较稳定.该抑制剂能特异性抑制凡纳滨对虾内源性胰蛋白酶的活性.抑制动力学试验结果表明,该抑制剂是竞争性抑制剂,其抑制常数Ki为1.69×10-9 mol/L.结论:重组凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂具有较高的抑制活性且较稳定,经优化表达条件后有望应用于新型对虾保鲜剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹敏杰		85	824	18.0	23.0
2	刘光明	集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心	68	501	13.0	18.0
3	蔡秋凤	集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心	27	221	9.0	13.0
4	翁凌	集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心	31	220	9.0	13.0
5	詹春兰	集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心	1	0	0.0	0.0
6	王慈	集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心	2	15	1.0	2.0