蛋白激酶PKR在HeLa细胞中的过表达及其siRNA干扰的鉴定

• 作者: 叶奕优 吴国华 吴娜 张志东 朱海霞 李健 李应国 赵志荀 颜新敏
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 羊痘病毒 PKR基因 真核表达 siRNA HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 43-47
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+4|Q784
• 语种: 中文

摘要

为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在HeLa细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对siRNA,检测其对PKR的干扰效果,以RT-PCR方法扩增PKR基因,克隆入表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-His(B),对重组质粒进行双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒或siRNAs分别转染HeLa细胞,Western-blot检测PKR蛋白的表达水平.结果表明:试验成功构建了PKR基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-PKR,重组质粒在HeLa细胞中得到了表达;2对siRNA具有较好的干扰效果,其中siRNA1、siRNA2对PKR的干扰效率分别达到76％和52％.