抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合达和活性鉴定

• 作者: 伍伟健 孙远明 王弘 董洁娴 詹屋强 饶美芳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 孔雀石绿 单链抗体 碱性磷酸酶 融合表达 直接竞争酶联免疫吸附法
• 年，卷（期）: 2016,（17）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 121-126
• 页数: 6页
• 分类号: TS207.3
• 字数: 4164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201617020

摘要

采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿(malachite green,MG)单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,PhoA)基因的载体plip6/GN中,成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv.随后重组质粒转入大肠杆菌BL21,经诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白scFv-PhoA大小约72 kD.利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制,经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL.本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短,这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王弘	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	5	41	3.0	5.0
2	孙远明	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	26	218	8.0	14.0
3	伍伟健	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	1	0	0.0	0.0
4	董洁娴	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	1	0	0.0	0.0
5	饶美芳	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	1	0	0.0	0.0
6	詹屋强	广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院	1	0	0.0	0.0