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UL29shRNA表达质粒与ACV对HSV-2抑制效果的比较
UL29shRNA表达质粒与ACV对HSV-2抑制效果的比较
作者:
丁娟
仵立佳
兰小凇
吕延成
潘晓瑜
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
RNA干扰
Ⅱ型单纯疱疹病毒
UL29基因shRNA
阿昔洛韦
摘要:
目的:通过将筛选的UL29shRNA表达质粒与抗病毒药物阿昔洛韦(ACV)的抗病毒效果及细胞毒性进行比较,探讨RNA干扰在细胞水平上对HSV-2病毒的抑制效果.方法:将筛选的干扰效果最好的表达质粒UL29-shRNA 1641作为RNA干扰组与抗病毒药ACV进行对HSV-2的抑制效果的比较研究,分为RNAi组、ACV组和RNAi+ACV组.采用实时荧光定量PCR检测UL29mRNA的相对表达量,Karber法检测细胞上清液中病毒滴度的变化、蛋白印迹法(Western blot)检测ICP8的相对表达量,对RNAi与ACV抑制效果进行比较,通过WST-1(Water-Soluble Tetrazolium-1)法对质粒转染复合物(质粒+转染试剂)和ACV的细胞毒性进行比较.结果:RT-PCR检测三组mRNA的相对表达水平,其中RNAi组UL29基因相对表达量高于ACV组(P<0.05);RNAi+ACV组UL29基因相对表达量明显低于RNAi组和ACV组(P<0.05).Karber法检测三组细胞上清液病毒滴度表明,RNAi组病毒滴度高于ACV组(P<0.05),RNAi+ACV组的病变病毒滴度明显低于RNAi组和ACV组(P<0.05).Western blot检测ICP8相对表达量,ACV组的ICP8(UL29编码的单链DNA结合蛋白,主要作用是在HSV-2 DNA复制过程中与复制叉产生了单链DNA结合,防止其重新配对形成dsDNA或被核酸酶降解)相对表达量比RNAi组低(P<0.05).RNAi+ACV组ICP8相对表达量降低最为明显,与ACV组和RNAi组相比有显著差异(P<0.05).WST-1法对转染复合物与ACV的细胞毒性进行比较,其中RNAi中质粒和转染试剂对细胞的毒性明显小于ACV.结论:在RNAi与ACV对HSV-2抑制效果的比较中,ACV要好于RNAi,两者联合使用的抑制效果好于单独使用RNAi或ACV.在抑制效果都较好的情况下比较,RNAi中使用的质粒与转染试剂对细胞的影响比ACV小.
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篇名
UL29shRNA表达质粒与ACV对HSV-2抑制效果的比较
来源期刊
现代生物医学进展
学科
医学
关键词
RNA干扰
Ⅱ型单纯疱疹病毒
UL29基因shRNA
阿昔洛韦
年,卷(期)
2016,(11)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
2057-2060,2086
页数
分类号
Q754|R37
字数
语种
中文
DOI
10.13241/j.cnki.pmb.2016.11.014
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引文网络
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Ⅱ型单纯疱疹病毒
UL29基因shRNA
阿昔洛韦
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研究来源
研究分支
研究去脉
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期刊影响力
现代生物医学进展
主办单位:
黑龙江省森工总医院
哈尔滨医科大学附属第四医院
出版周期:
旬刊
ISSN:
1673-6273
CN:
23-1544/R
开本:
16开
出版地:
黑龙江省哈尔滨市和兴路32号
邮发代号:
14-12
创刊时间:
2001
语种:
chi
出版文献量(篇)
22114
总下载数(次)
63
总被引数(次)
99951
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