隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较

• 作者: 宋悦 张晓丽 张烨华 游艳敏 程龙 米荣升 贾海燕 赵权 陈兆国 韩先干 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 隐孢子虫 实时荧光定量PCR 检测 敏感性 特异性 重复性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 48-55
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4838字
• 语种: 中文

摘要

为筛选一种检测谱广、敏感性好、特异性高的隐孢子虫实时荧光定量PCR法,对JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法三种隐孢子虫实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了检测,并与基于18S rDNA序列的套式PCR方法进行了比较.结果显示,以10倍倍比稀释的含有微小隐孢子虫18S rDNA基因片段的重组质粒为模板,成功地建立了三种实时荧光定量PCR方法;敏感性试验显示,JVAP18S法和Csp18S法最低可检测0.1个卵囊,而CRU18S法最低只能检测到1个卵囊,但他们均比套式PCR方法敏感;特异性试验结果显示,三种实时荧光定量PCR法均可检测微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)和贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),而其他属寄生虫和细菌DNA的检测结果均为阴性;重复性试验结果显示,JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法的批内变异系数分别为0.69%~2.68%、0.11%~4.93%、0.04%~2.89%,批间变异系数分别为0.52%~5.75%、2.09%~5.13%、1.15%~3.71%;对50份小鼠田间粪便样品检测结果显示,JVAP18S法检测的阳性率为84.00%,显著高于套式PCR法检测的64.00%的阳性率.上述结果表明,三种实时荧光定量PCR法均能有效检测隐孢子虫,比较而言,JVAP18S法敏感性高、特异性强、重复性好,尤其适合于隐孢子虫含量较少的样品检测.