N端规则泛素E3连接酶UBR2真核表达载体的构建及验证

• 作者: 冯云 刘承波 刘靖 朱彩芬 赵晗 黄慧娟
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: N-端规则泛素E3连接酶 UBR2 过表达
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 323-326
• 页数: 4页
• 分类号: R345
• 字数: 2732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2017.06.003

摘要

目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核表达载体pEGFP-N2-UBR2,并转染HepG2细胞,转染后利用荧光显微镜,Western印迹检测UBR2的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pEGFP-N2-UBR2构建正确;转染后24 h,利用荧光显微镜观察,在转染pEGFP-N2-UBR2的HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白,在蛋白水平可以检测到UBR2蛋白过表达.结论 成功构建pEGFP-N2-UBR2过表达载体,并在HepG2细胞中验证其过表达效率.为今后研究其在细胞生长和增殖过程中的作用奠定基础.