戊型肝炎病毒ORF3及其截短突变体真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达

• 作者: 和占龙 李饴 杨凤梅 段素琴 王俊斌 禹文海 赵远 郭映秋 马进
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 ORF3 截短突变 A549肺癌细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 317-322
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2017.06.002

摘要

目的 构建戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)的开放阅读框3(open reading frame, ORF3)基因及其突变体真核表达载体,并在人肺癌细胞系A549中表达.方法 以PUC-HEV为模板,PCR扩增HEV ORF3及其突变体目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1-Flag中,构建重组质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag,并转染A549细胞,利用Western印迹法检测ORF3及其突变体编码蛋白的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag构建正确,在转染A549细胞24 h后,在蛋白水平可以检测到ORF3及其突变体编码蛋白.结论成功地构建了HEV ORF3及其突变体真核表达载体,并在A549细胞中成功表达,为后期研究HEV各ORFs组分功能及其致病机制奠定基础.