树鼩白细胞介素6的原核表达、纯化及免疫原性鉴定

• 作者: 丁晨 姚月婷 寸韡 徐盟 李智华 李育中 毕研伟 肖红剑 郝嘉茂 闫玲梅 龙琼
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 树鼩 白细胞介素-6 原核表达 纯化 免疫原性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 768-772
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3507字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.009

摘要

目的:克隆树鼩白细胞介素6(IL-6)基因,在大肠杆菌中高效表达、纯化,并鉴定免疫原性.方法:根据Gen-Bank预测的树鼩IL-6基因序列设计引物并扩增基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建的重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达;表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IL-6的分布情况.结果:酶切及测序证实重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29x 103,纯化后复性的重组蛋白纯度可达95％以上,免疫兔子后Western印迹和ELISA鉴定其具有免疫原性,在气管、心、脾、肾中能检测到IL-6.结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IL-6,纯化复性后具有良好的免疫原性.