抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价

• 作者: 于晓妍 侯小娟 孙志伟 徐磊 杜鹏 王双 袁旭东 郁雯科 陈鸿斌
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 双特异性抗体 FIT-Ig α干扰素 抗原结合表位 中和活性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 742-749
• 页数: 8页
• 分类号: R392.1|Q78
• 字数: 6213字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.005

摘要

目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体.方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig (Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN-α的双特异性抗体FIT2的表达载体,并在FreeStyle 293-F系统中进行瞬时转染表达;采用protein A柱亲和纯化目标双特异性抗体,SDS-PAGE初步考察目标抗体的相对分子质量、组分及纯度;采用forteBIO系统鉴定其整体结合活性,并分别确认双特异性抗体的2个抗原结合表位的活性;通过ELISA方法评价其特异性,37℃放置实验鉴定其稳定性,Daudi细胞增殖实验定量评价双特异性抗体的中和活性.结果:构建了双特异性抗体FIT2表达载体,在FreeStyle 293-F系统中实现了瞬转高效表达,表达量为127 mg/L,亲和纯化获得目标双特异性抗体FIT2,纯度可达98.5％;FIT2结构稳定,具有良好的特异性,未发现与其他类型的干扰素及细胞因子存在交叉反应;FIT2对IFN-αl b-His的结合活性显著优于2个亲本抗体,特别是解离过程的改善尤为明显;同时,FIT2有效保留了2个抗原结合表位的活性;细胞增殖实验结果显示,FIT2对IFN-o1b具有优越的中和活性,其中和效能显著高于任一亲本抗体,明显优于2个亲本抗体联用.结论:获得了对IFN-o1b中和活性有突破性提升的双特异性抗体FIT2,特异性良好且结构稳定,有望成为治疗IFN-α相关疾病的良好的成药候选分子.