炭疽芽胞杆菌A16D2株BA2380基因缺失突变株的构建

• 作者: 冯尔玲 刘先凯 彭清忠 朱力 王东澍 王恒樑 王甜甜 贾书骅 陈楠
• 来源期刊: 微生物与感染
• 关键词: 炭疽芽胞杆菌 GoldenGate克隆 基因替换 同源重组
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 164-171
• 页数: 8页
• 字数: 5677字
• 语种: 中文

摘要

本课题组早期研究结果表明,炭疽芽胞杆菌BA2380蛋白可能与炭疽芽胞杆菌毒力有关,因而有必要对其功能进行深入研究.选取炭疽芽胞杆菌A16D2株为出发菌株,以其BA2380基因为目的缺失基因,参照A16D2株基因组序列及质粒pSET4s序列,利用软件设计上下游同源臂及抗性基因引物,用本实验室改造的"Golden Gate"克隆方法将3个片段同时连入温敏型穿梭载体pKMBK中(本实验室构建的受体质粒),从而构建基因打靶质粒.将该基因打靶质粒导入炭疽芽胞杆菌A16D2感受态细胞中,利用同源重组原理,筛选获得炭疽芽胞杆菌A16D2 BA2380基因缺失突变株,并对其进行验证.结果验证了本课题组构建的"Golden Gate"克隆体系进行多片段克隆的高效性,也为后续探索其基因功能奠定了基础.