猴D型逆转录病毒p27基因的原核表达及流式免疫荧光微球检测技术的建立

• 作者: 刘助红 尹雪琴 张钰 李秀珍 王静 郭鹏举 黄韧
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猴D型逆转录病毒 p27基因 原核表达 流式免疫荧光微球检测技术
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 17-23
• 页数: 7页
• 分类号: R?33
• 字数: 4225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.004

摘要

目的 构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白,并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测.方法 通过PCR扩增p27基因片段,与pGEX?4T?1表达载体进行连接,转化至BL21(DE3)进行表达.通过SDS?PAGE分析蛋白表达的形式及最佳诱导时间.采取GST树脂纯化目标蛋白,包被磁珠,建立流式免疫荧光微球检测技术,用于临床样本的检测.结果 重组蛋白以可溶的上清液进行表达,诱导的最佳时间为4h.包被磁珠后,成功建立流式免疫荧光微球检测技术,对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性,对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应,特异性强,与ELISA法同时对24份临床样本进行检测,其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性,ELISA检测结果为2份阳性,1份阴性,两种方法的检测结果符合率为96％.结论 成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白,并运用该蛋白建立了灵敏度高,特异性强,样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术,为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础.