重组葡萄糖脱氢酶的表达及辅酶再生应用研究

• 作者: 刘曜宁 吕早生 宋采薇 左振宇 李凌凌 杨忠华
• 来源期刊: 武汉科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 葡萄糖脱氢酶 重组菌 异源表达 辅酶再生 生物催化 环己酮 枯草芽孢杆菌
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 155-160
• 页数: 6页
• 分类号: Q789|TQ925
• 字数: 5124字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-3644.2017.02.014

摘要

为解决异源表达酮还原酶域EryKR1的重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(pET28a-eryKR1)催化环己酮还原时消耗的氢供体NADPH再生的问题,构建了克隆枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因gdh的重组菌E.coliBL21(pET28a-gdh),其中的gdh基因经Nucleotide BLAST功能分析显示与枯草芽孢杆菌9902的gdh基因序列(登录号为EF626962.1)的一致性达到100%.SDS-PAGE检测显示该重组菌经IPTG诱导后可以高效表达出葡萄糖脱氢酶(GDH),其表达量占全菌可溶性蛋白质的64%.GDH粗酶液的比酶活为137.90 U/mg.通过气相色谱检测添加了E.coli BL21(pET28a-gdh)的E.coli BL21(pET28a-eryKR1)环己酮还原反应体系中的环己醇含量,结果显示加入重组GDH的双重组菌耦合反应体系中环己醇的产率为82.21%,是未添加GDH的反应体系对应值的3.23倍,表明重组GDH可以为EryKR1还原环己酮系统解决辅酶再生问题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕早生	武汉科技大学化学与化工学院	113	452	10.0	14.0
2	杨忠华	武汉科技大学化学与化工学院	33	295	10.0	16.0
3	李凌凌	武汉科技大学化学与化工学院	21	74	6.0	7.0
4	左振宇	武汉科技大学化学与化工学院	13	25	3.0	4.0
5	刘曜宁	武汉科技大学化学与化工学院	2	0	0.0	0.0
6	宋采薇	武汉科技大学化学与化工学院	2	0	0.0	0.0