活化转录因子6-C/EBP同源蛋白途径介导晚期糖基化白蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

• 作者: 周健 姚树桐 康攀攀 焦鹏 王志超 田华 秦树存 郭甜甜
• 来源期刊: 生理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 晚期糖基化白蛋白 活化转录因子6 C/EBP同源蛋白 巨噬细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 767-774
• 页数: 8页
• 分类号: R285.5|R363.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13294/j.aps.2017.0088

摘要

本文旨在研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)感受器活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)是否介导晚期糖基化白蛋白(advanced glycated albumin,AGE-alb)所诱导的巨噬细胞凋亡,并阐明其可能的分子机制.体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予AGE-alb(2、4和6 9/L)处理24 h,以正常白蛋白和ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理24 h的巨噬细胞分别作为阴性和阳性对照组,并采用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)技术沉默ATF6表达.分别采用MTT法和Annexin V-FITC/碘化丙碇双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性;免疫荧光细胞化学法检测ATF6核转位情况;Western blot法检测ATF6和促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达变化,实时荧光定量聚合酶链反应法检测CHOP mRNA表达变化.结果显示:与TM相似,AGE-alb在蛋白和mRNA水平均显著上调ERS凋亡途径关键分子CHOP表达,该作用呈浓度依赖性;Western blot和免疫荧光细胞化学法均显示AGE-alb处理细胞后ATF6明显由胞浆向细胞核内转移;采用siRNA技术沉默ATF6则明显减轻AGE-alb所致的细胞活力降低、LDH漏出、凋亡率增加及caspase-3活化,并可抑制AGE-alb所诱导的CHOP表达上调.上述结果表明,ATF6及其下游分子CHOP介导AGE-alb所诱导的巨噬细胞凋亡.