猪传染性胃肠炎病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用

• 作者: 徐志文 徐逸飞 朱玲 李小璟 李幽幽 李雨濛 蔡瑶 陈瑛琪 龚双燕
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 荧光定量PCR检测 初乳
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1076-1081
• 页数: 6页
• 分类号: S858.282.65
• 字数: 3833字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.05.018

摘要

为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法.根据GenBank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法.该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较.结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本.说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测.