木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 余厚美 安飞飞 欧文军 秦于玲 罗秀芹 陈松笔
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 木薯 钙调蛋白 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1317-1323
• 页数: 7页
• 分类号: Q94-336
• 字数: 6249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1004-1389.2017.09.008

摘要

钙调蛋白(CaM)作为重要的抗逆信号转导蛋白,在调控木薯抗逆境和块根采后生理腐烂中起重要作用,为给快速检测木薯在不同生长环境中CaM蛋白的表达水平提供优良抗体,克隆木薯CaM基因并将目的基因插入原核表达载体,经Escherichia coli表达并纯化,用纯化的融合蛋白ACP-CaM免疫Balb/C小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选能产生抗CaM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA等方法对制备的单克隆抗体进行初步鉴定.Western blot分析结果显示原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达CaM,免疫小鼠后取效价高的2#小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,共获得7株效价均达到106以上、能稳定分泌抗CaM抗体的细胞株,这7株单抗与淀粉磷酸化酶、His、BSA均无交叉反应,4D5株与标签蛋白ACP有交叉反应,表明其余6株均为CaM特异性抗体;抗体亚型鉴定结果显示7株单抗均为IgG型抗体.