灰葡萄孢BcKMO基因的原核表达分析

• 作者: 刘媛媛 周帆 姜婷婷 张靖 时翠平 王敏 董金皋 邢继红 郑旭
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 灰葡萄孢 BcKMO 原核表达 纯化 PCR
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: S431.03|Q78
• 字数: 4084字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.01.011

摘要

为构建灰葡萄孢犬尿氨酸单加氧酶(BcKMO)基因的原核表达载体并进行高效表达,获得纯化的BcKMO蛋白.以灰葡萄孢野生型BC22为试材,通过反转录PCR扩增BcKMO基因,回收BcKMO基因片段克隆到pMD19-T载体中,测序正确后,酶切pMD19-T-BcKMO和带有GST标签蛋白的pGEX4T-1质粒,将目的片段进行连接,构建BcKMO基因的原核表达载体pGEX4T-1-BcKMO-GST.经酶切和测序鉴定正确后,将构建好的原核载体转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21菌株中成功表达了与GST标签蛋白融合的BcKMO蛋白,大小约71 kDa.SDS-PAGE分析表明,该蛋白在0.2 mmol/L IPTG诱导12h时高效表达;Western Blot结果发现目的蛋白能与GST特异性抗体起特异性反应,表明BcKMO基因的体外诱导表达成功.