副溶血弧菌CalR蛋白的表达纯化及其DNA结合活性分析

• 作者: 侯书宁 孙佳遥 张义全 张凌宇 赵昕 黄新祥
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 副溶血弧菌 CalR DNA结合活性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 36-39
• 页数: 4页
• 分类号: R378.3
• 字数: 2895字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y160297

摘要

目的:原核表达和纯化副溶血弧菌的CalR蛋白并分析其DNA结合活性,为后续深入研究其对靶基因的分子调控机制奠定基础.方法:以副溶血弧菌野生株RIMD2210633基因组DNA为模板,PCR扩增calR的编码区序列,将其克隆入pET28a中获得重组载体;将重组载体导入大肠埃希菌BL21λDE3中,获得重组蛋白表达菌株,该菌株经IPTG诱导表达His6-CalR,用Ni-柱树脂进行蛋白纯化.PCR扩增T3SS1相关基因exsC、exsD和VP1687的启动子区序列,通过凝胶阻滞实验检测His6-CalR蛋白对它们的结合活性.结果:成功表达纯化出可溶性His6-CalR蛋白;凝胶阻滞实验结果显示,重组蛋白His6-CalR能够直接结合exsC、exsD和VP1687的启动子区.结论:本研究表达纯化的副溶血弧菌CalR蛋白具有DNA结合活性,可用于后续的转录调控机制研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵昕	江苏大学医学院生物化学研究室	9	15	2.0	3.0
2	黄新祥	江苏大学医学院生物化学研究室	57	333	5.0	17.0
3	张义全	江苏大学医学院生物化学研究室	7	10	2.0	3.0
4	侯书宁	江苏大学医学院生物化学研究室	4	3	1.0	1.0
5	张凌宇	江苏大学医学院生物化学研究室	2	3	1.0	1.0
6	孙佳遥	江苏大学医学院生物化学研究室	1	1	1.0	1.0