副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用

• 作者: 刘永杰 刘迎春 李欣彤 王少辉 王权 白雪瑞 蒋蔚 陈永军 韩先干
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副溶血弧菌 直接溶血素 蛋白表达 斑点-ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 细菌
• 页码范围: 56-62
• 页数: 7页
• 分类号: S852.616
• 字数: 4979字
• 语种: 中文

摘要

副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子.本研究根据已发表基因序列(GenBank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧茵SHJLA株基因组DNA为模板,扩增编码TDH蛋白的基因,克隆至表达质粒pET28a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为576 bp.重组原核表达质粒pET28a-tdh转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导可表达分子量约为27 kDa的融合蛋白,主要以包涵体形式表达.对包涵体进行复性,Western blot分析表明经过复性后的重组蛋白能够被感染副溶血弧菌SHJLA株的小鼠血清识别.重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1:256 000以上.将该多抗初步应用于斑点-ELISA(Dot-ELISA)方法的建立,TDH阳性的致病性副溶血弧菌检测到阳性斑点,而TDH阴性的副溶血弧菌及其他细菌未检测到特异性斑点.本研究可为深入研究TDH的蛋白功能,建立致病性副溶血弧菌免疫学快速诊断方法以及保护性疫苗的研制提供研究基础.