小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备

• 作者: 刘志刚 吉琼梅 杨平常 邬玉兰 陈献雄
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 小龙虾 钙结合蛋白 免疫学特性 鉴定 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 字数: 3031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2017.02.008

摘要

目的 克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体.方法 用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting 和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合;利用ELISA法筛选出能分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,然后利用该杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,用蛋白A亲和层析方法纯化获得抗体;通过Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过Western Blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的交叉性和特异性.结果 经SDS-PAGE鉴定获得了纯度较高的重组SCP,免疫学鉴定结果显示,重组的SCP蛋白具有较好的IgE结合活性,阳性率为40%.通过杂交瘤细胞融合技术,共获得了抗SCP细胞株2株,分别命名为1A12和3H12,效价均高于20万.经抗体亚型鉴定,2株抗体均为IgG1型.Western Blot的结果表明2株抗体能识别重组SCP.在特异性检测实验中,1A12抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而3H12与鱼粗蛋白过敏原有交叉反应性.结论 SCP是小龙虾的重要过敏原,本实验获得了纯度较高的重组SCP,并制备了2株高效价抗SCP单克隆抗体,为小龙虾SCP、甲壳类食物过敏原的检测及标准化过敏原物质的制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬玉兰	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	36	133	6.0	8.0
2	刘志刚	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
3	杨平常	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	28	67	5.0	6.0
4	陈献雄	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	17	32	3.0	4.0
5	吉琼梅	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	3	12	3.0	3.0