伪狂犬病病毒变异株gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 单同领 叶超 徐晶晶 李国新 武吉强 王涛 童光志 童武 郑浩
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒 变异株 gE蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3511字
• 语种: 中文

摘要

为制备伪狂犬病病毒变异株gE蛋白的单克隆抗体,PCR扩增伪狂犬病病毒gE蛋白主要抗原表位区的基因片段,并将其克隆至原核表达载体pCold-TF.经1 mmol/L IPTG低温诱导,表达了约90 kDa的gE融合蛋白.融合蛋白用镍离子金属亲和层析柱纯化后,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,经细胞融合和筛选,获得了2株稳定分泌抗gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(5B2和6E6).间接免疫荧光试验(indirect immunofl uorescence assay,IFA)显示2株单克隆抗体均能与PRV变异株(JS-2012)反应,但与gE缺失的疫苗毒Bartha-K61株无反应.Western blot结果显示5B2和6E6与gE蛋白不反应,提示2株单克隆抗体针对的可能是gE蛋白的构象表位.本研究获得的gE蛋白单克隆抗体为伪狂犬病病毒变异株的鉴定与功能研究以及野毒株和疫苗株的鉴别诊断提供了良好的工具.