采用CELⅠ酶粗提物高效鉴定CRISPR/Cas9介导的基因突变

• 作者: 周泽娇 李晓霞 李洪清 杜荣裕 林秋鹏 罗婉冰 阳辉勇
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: CELⅠ粗提物 CRISPR/Cas9 突变体 鉴定 stn1
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 775-784
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.160388

摘要

CRISPR/Cas9是新兴的基因组编辑技术,该技术操作简单、效率高,已成为目前最主流的基因组编辑技术.利用该技术进行突变体创制,对基因功能研究和育种应用具有重要的意义,而快速、高效、低成本的基因编辑个体鉴定是其中的重要环节.本研究对影响CELⅠ粗提物鉴定CRISPR/Cas9介导的水稻基因编辑个体的条件,包括蛋白用量及作用时间、PCR反应缓冲液等条件进行了探索,并将整个检测体系集成于一管操作.同时,采用CELⅠ粗提物检测了CRISPR/Cas9介导水稻stn1突变的T0代植株及后代,对杂合突变、纯合突变及双等位突变的鉴定策略进行了探讨;该方法检测正确率经测序验证达100％.上述结果表明,采用CELⅠ粗提物检测突变体与已有方法比较具有廉价、快速和高效的特点.