稳定表达PRRSV ORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌的构建及其生物学特性

• 作者: 刘莎莎 廖成水 张俊峰 张春杰 张晓洁 杨亚东 王二鑫 程相朝 陈松彪
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: PRRSV ORF5-ORF6 减毒猪霍乱沙门菌 二联疫苗 生物学特性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 47-53
• 页数: 7页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2017.01.007

摘要

为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌,以pMD19-T-ORF5-7为模板,PCR分别扩增出ORF5和ORF6,将2个基因先后插入表达载体PYA3493,构建了重组质粒PYA3493-ORF5-ORF6.PCR、双酶切及测序结果表明,成功构建了重组质粒pYA3493-ORF5-ORF6.将该重组质粒电转至减毒猪霍乱沙门菌△crp△cya△asdC78-1基因缺失株,获得PRRSVORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌△crp△cya△asdC78-1 (pYA3493-ORF5-ORF6),并对该重组减毒猪霍乱沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定.进一步对重组减毒猪霍乱沙门菌△crp△cya△asd C78-1 (pYA3493-ORF5-ORF6)研究发现,其生长速度比强毒株C78-1明显减慢,与△crp△cya△asd C78-1缺失株及△crp△cya△asdC78-1 (pYA3493)互补菌株基本一致.在体外连续传代能够稳定遗传ORF5-ORF6融合基因.重组菌培养上清经SDS-PAGE能检测到ORF5-ORF6蛋白条带,且经Western-blot分析证实,重组菌共表达的GP5和M蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合.以上结果表明,能稳定携带ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌△crp△cya△asdC78-1(pYA3493-ORF5-ORF6)构建成功,为开发猪繁殖与呼吸综合征和仔猪副伤寒基因工程二联疫苗奠定了良好基础.