基于恒温隔绝式荧光PCR技术现场检测牛轮状病毒方法的建立及应用

• 作者: 岳华 张斌 李凡 汤承 邱莞思 黄建德
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 牦牛 轮状病毒 VP6基因 恒温隔绝PCR 现场检测
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1092-1098
• 页数: 7页
• 分类号: S852.653|S852.659.4
• 字数: 5390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.06.014

摘要

轮状病毒(rotavirus,RV)是犊牛腹泻的重要病因,笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技术现场检测牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法.根据BRV和牦牛RV VP6基因序列,设计合成引物和探针,通过优化反应体系,配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒,建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法.结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV,不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原;检测下限为96.6 copies·μL-1,重复性好;对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明,本方法对BRV的检出率是33.33％,对牦牛RV的检出率为73.33％,与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100％;对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98.86％.本研究建立的BRViiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,既可用于BRV检测,又可用于牦牛RV的检测;从核酸提取到报告检测结果仅需1h,操作方便,可现场使用,为BRV的现场快速诊断提供有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凡	西南民族大学生命科学与技术学院	4	14	2.0	3.0
2	邱莞思	西南民族大学生命科学与技术学院	2	8	2.0	2.0