牛轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 于力 周玉龙 孟野 常继涛 曹禹 盛守志 翟海瑞 胡林杰 范增磊 范春玲 贾伟强
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牛轮状病毒 SYBRGreenⅠ 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.4
• 字数: 3891字
• 语种: 中文

摘要

旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,与常规PCR方法比较.结果显示,建立的RT-qPCR方法最佳引物浓度为5μmol/L,退火温度为58℃,40个循环,熔解温度为77℃±0.5℃,最小检出量8.13 copies/μL.两种方法检出率分别为30.4％和19.6％,RT-qPCR具有较高敏感性.建立的RT-qPCR可为BRV感染早期诊断、分子流行病学调查及定量检测分析等提供技术保障.