PCR联用HPLC快速筛选野生冠菌素生产菌

• 作者: 姜峰 李召虎 段留生 王春燕 胡堂路 谭伟明
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 冠菌素生产菌 特异PCR 高效液相色谱(HPLC) 快速筛选
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1870-1877
• 页数: 8页
• 分类号: S182
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.11.014

摘要

冠菌素(coronatine,COR)是由丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)某些致病变种产生的一种新型植物生长调节剂.建立冠菌素生产野生菌快速检测方法对于丰富其菌种资源、推进冠菌素的研究和应用具有重要意义.本研究根据冠菌素合成相关功能基因corS、corR设计2对特异性引物,利用PCR技术及高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)法从32株野生菌中筛选冠菌素产素菌.结果表明,设计的特异性引物在以冠菌素产生菌模式菌为模板时能特异性扩增出目的片段,分别为850bp (corS)和450 bp (corR),以非产素参考菌株为模板时不能扩出此片段,具有较好的特异性;用该PCR方法成功从32株野生菌中筛选获得3株冠菌素产素候选菌,经HPLC复筛后,其中2株发酵产物检出冠菌素,其产量分别为6.5和2.1 mg/L.与传统鉴定方法相比,特异PCR与HPLC联用的方法在野生冠菌素产素菌的检测筛选中更快捷、更高效,可用于大批量野生菌的快速筛选,发现产率更高的菌种资源并进行进一步的工程菌构建,为生物调节剂冠菌素的工业化生产和规模化的农业应用提供支持.