埃博拉病毒截短型糖蛋白GPdmucin的表达与纯化

• 作者: 于长明 吴诗坡 宋小红 张冠英 房婷 王潇霖 范鹏飞 迟象阳 陈旖 陈薇
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 埃博拉病毒 截短型糖蛋白 哺乳动物表达系统 生物学活性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 50-57
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|R392
• 字数: 5192字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.01.009

摘要

目的:确定黏蛋白区缺失的埃博拉病毒包膜糖蛋白(GPdmucin)的最佳表达系统,并获得纯化的GPdmucin.方法:从埃博拉病毒的包膜糖蛋白(GP)全长基因上扩增GPdmucin序列,构建至pET32a、pFastBac1和pcDNA3.4三种不同表达系统的质粒中,分别在原核、昆虫和哺乳动物表达系统中进行表达,并用特异抗体鉴定表达情况.结果:原核系统表达的GPdmucin不稳定,活性差;在昆虫表达系统中,GPdmucin在细胞内以不溶形式表达;利用Expi293瞬时蛋白表达系统,GPdmucin在哺乳动物细胞中可溶性表达,Ni柱亲和层析获得的目的蛋白纯度达90％以上,且与特异抗体具有很好的结合活性.结论:获得哺乳动物细胞表达系统表达的GPdmucin蛋白,将用于GPcl的制备、GP抗体筛选、疫苗效果评价及病毒致病机理的研究.