苹果属3种检疫性疫霉的四重PCR分子检测

• 作者: 廖芳 张豆豆 曹保红 朱林慧 李关荣 李碧娟 罗加凤
• 来源期刊: 西南大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 苹果属 检疫性真菌 冬生疫霉 丁香疫霉 栗黑水疫霉 四重PCR分子检测
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 农业科学
• 页码范围: 7-14
• 页数: 8页
• 分类号: S436.611.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13718/j.cnki.xdzk.2017.05.002

摘要

为建立苹果属冬生疫霉Phytophthora hibernali、 丁香疫霉P.syringae和栗黑水疫霉P.cambivora 3种检疫性疫霉的同步分子检测方法, 根据疫霉属18S rRNA,ITS,HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物, 冬生疫霉、 丁香疫霉及栗黑水疫霉特异引物, 建立了四重PCR检测方法, 并进行了灵敏度和模拟带菌测试. 建立了可同时检测苹果属上冬生疫霉、 丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异四重PCR检测体系: 在20 μL反应体系中, 最佳引物浓度组合为10 μmol/L的18SUF/18SUR,PHSF/PHSR,PCSF/PCSR和PSSF/PSSR分别为0.2,0.6,0.8,1.0 μL;最佳退火温度和退火时间分别为63 ℃和20 s. 该体系扩增冬生疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和232 bp的ITS基因特异带, 丁香疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和683 bp的HSP90基因特异带, 扩增栗黑水疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和314 bp的Ypt1基因特异带, 对照菌只出现18S rRNA条带;四重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出4个片段. 表明该四重PCR检测方法能实现冬生疫霉、 丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异检测, 实现苹果属类水果及种苗检疫性疫霉的快速检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李关荣	西南大学农学与生物科技学院	32	134	6.0	9.0
2	李碧娟	西南大学农学与生物科技学院	3	11	3.0	3.0
3	朱林慧	西南大学农学与生物科技学院	5	14	3.0	3.0
4	廖芳		2	13	2.0	2.0
5	曹保红	西南大学农学与生物科技学院	1	3	1.0	1.0
6	张豆豆	西南大学农学与生物科技学院	1	3	1.0	1.0
7	罗加凤		2	13	2.0	2.0