利用CRISPR/Cas9系统抑制Kan耐药基因水平转移研究

• 作者: 单彩龙 卞晓锐 徐桐桐 李国才 焦红梅 赵丹 阴银燕
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 细菌耐药性 水平基因转移
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 281-286
• 页数: 6页
• 字数: 4117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.04.008

摘要

目的 研究细菌耐药基因水平转移的控制技术.方法 以卡那霉素耐药基因Kan为靶基因设计3组靶向sgRNA,分别退火后插入到pCas9质粒中,重组菌用氯化钙法制成感受态,将含有Kan耐药基因的质粒pET-30a向其转化,转化菌液分别涂布含氯霉素和含氯霉素/卡那霉素平板,比较各组转化效率.将携带Kan特异性sgRNA的重组质粒分别转化含pET-30a的大肠埃希菌,PCR检测Kan耐药基因的降解,并绘制转化子在氯霉素平板上的生长曲线以分析特异性sgRNA对受体菌生长的影响.结果 所设计的3组sgRNA中有2组可以介导CRISPR/Cas9系统对Kan耐药基因水平转移的完全抑制,其余1组也可使转移效率降低88.08%.抑制机制为特异性CRISPR/Cas9系统降解了Kan耐药基因.未发现3组sgRNA对受体菌生长有明显影响.结论 特异性CRISPR/Cas9系统可抑制细菌Kan耐药基因的水平转移.