肥城桃果实己糖激酶Ⅱ基因克隆、生物信息学分析及原核表达

• 作者: 张凯 朱树华 高珊
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 肥城桃 己糖激酶 基因克隆 生物信息学分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 页码范围: 85-91
• 页数: 7页
• 分类号: S662.03|Q78
• 字数: 3345字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.06.013

摘要

为了深入研究己糖激酶(HK)的同工酶HKⅡ调控线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放机理,通过RT-PCR技术和RACE技术,以克隆得到的肥城桃果实cDNA为模板,成功克隆得到HKⅡ基因全长,经原核表达和SDS-PAGE检测,体外构建原核表达载体pET-30a-HKⅡ,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;使用镍柱纯化法,得到纯化的重组蛋白.克隆得到HKⅡ基因共1835 bp,其中编码区1496 bp,共编码497个氨基酸.HKⅡ蛋白预测分子式为C2379 H3846 N652 O717 S17,原子总数为7611个,分子量为53.6 kDa,理论等电点为6.17,总平均疏水指数为0.023,表明HKⅡ蛋白为疏水性蛋白.TMHMM跨膜结构预测HKⅡ为跨膜蛋白,有1次跨膜,绝大部分在膜外.从二级结构预测结果来看,HKⅡ蛋白由15段α螺旋和11段β折叠和无规则卷曲构成.肥城桃HKⅡ蛋白预测的三级结构呈V字型,折叠结构较多.系统进化树和氨基酸相似性分析发现,桃果实HKⅡ与枇杷的相似度最高,达到了96.98％,桃果实HKⅡ与其他植物HK的氨基酸的同源性较高,说明HKⅡ具有较高的保守性.为进一步解析HKⅡ蛋白的结构和功能从而探讨HKⅡ调控线粒体MPTP的机理奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱树华	山东农业大学化学与材料科学学院	58	654	13.0	25.0
2	高珊	山东农业大学化学与材料科学学院	10	6	2.0	2.0
3	张凯	山东农业大学化学与材料科学学院	5	8	2.0	2.0